В какую пробирку осуществляет забор крови для исследования на вич

Обновлено: 04.07.2024

В Центре регулярно осуществляется консультирование как ВИЧ-позитивных пациентов, так и их родственников по вопросам санитарно-гигиенического поведения в семье и вопросам профилактики в семье (возможных контактов с кровью и биологическими жидкостями).

• Если у Вас нет ВИЧ-инфекции, но ваше поведение связано с риском заражения, изменив его Вы, избежите инфицирования в будущем.

• Если Вы и Ваш партнер дискордантная пара (где один партнер ВИЧ+, а другой ВИЧ-), то знание собственного статуса и статуса партнера поможет Вам договориться о безопасном сексуальном поведении и позволит Вам иметь здоровых детей.

• Знание своего ВИЧ-статуса беременной женщине позволяет значительно снизить риск передачи вируса ребенку.

• Если Вы живете с ВИЧ, Вы защищаете от заражения других людей. Чем раньше проведено обследование и начато лечение, тем больше шансов сохранить здоровье.

• Современное лечение ВИЧ-инфекции доступно в России и представляется бесплатно.

Если у вас ВИЧ, попытайтесь поддерживать себя в хорошей физической форме. Для этого необходимо:

• Пользоваться диетой, включающей богатую протеинами, витаминами и углеводами пищу. Ваше тело нуждается в пище для того, чтобы развиваться, получать энергию и защищаться от инфекции.

• По возможности поддерживать активность для того, чтобы оставаться в форме, поддерживать режим сна и бодрствования. Физические упражнения помогают избежать депрессии и волнений и вносят вклад в общее ощущение благосостояния, а также сопутствуют поддержанию общего тонуса и сопротивляемости организма.

• По возможности продолжать работать.

• Заниматься имеющим смысл или по крайней мере отвлекающим делом.

• Общаться с семьей и друзьями.

• Говорить с кем-нибудь о болезни и диагнозе.

• Использовать презервативы, занимаясь сексом.

• Обращаться за помощью по медицинским проблемам, следовать советам относительно ухода, включая советы социальных и консультирующих служб.

• Снижать или избегать стрессов, определяя потенциальные или существенные их факторы.

• Обо всех изменениях в состоянии здоровья, ухудшении самочувствия сообщайте своему лечащему врачу. Регулярное медицинское наблюдение и, при необходимости, специфическое лечение – это то, что поможет Вам вести полноценный образ жизни долгие годы.

Каждый пятый в России не знает о своем диагнозе. Мы настоятельно рекомендуем регулярно проходить тестирование на ВИЧ. Каждый уважающий себя человек должен знать свой ВИЧ-статус. Этот тест должен стать таким же рутинным, обычным, как например, общий анализ крови. Жители РФ имеют право на бесплатное тестирование на ВИЧ в поликлиниках по месту жительства, в кабинетах анонимного тестирования и консультирования или в Центрах по профилактике и борьбе со СПИДом.

В Московской области адреса кабинетов тестирования представлены на сайте областного Центра СПИД.

Основным методом выявления ВИЧ-инфекции является проведение тестирования на антитела к ВИЧ. Освидетельствование на ВИЧ-инфекцию (в том числе и анонимное) осуществляется в медицинских учреждениях всех форм собственности с информированного согласия пациента в условиях строгой конфиденциальности, а в случае обследования несовершеннолетних в возрасте до 14 лет – по просьбе или с согласия его законного представителя. Тестирование добровольное и проводится с обязательным до- и послетестовым консуль¬тированием по вопросам профилактики ВИЧ-инфекции.

• Доноры крови и (или) ее компонентов, биологических жидкостей, органов и тканей – при каждом взятии донорского материала;

• Работники отдельных профессий, производств, предприятий, учреждений и организаций-при проведении обязательных предварительных при поступлении на работу и периодических медицинских осмотров, к ним относятся:

Врачи, средний и младший медицинский персонал центров по профилактике и борьбе со СПИДом, учреждений здравоохранения, специализированных отделений и структурных подразделений учреждений здравоохранения, занятые непосредственным обследованием, диагностикой, лечением, обслуживанием, а также проведением судебно - медицинской экспертизы и другой работы с лицами, инфицированными вирусом иммунодефицита человека, имеющие с ними непосредственный контакт;

Врачи, средний и младший медицинский персонал лабораторий (группы персонала лабораторий), которые осуществляют обследование населения на ВИЧ-инфекцию и исследование крови и биологических материалов, полученных от лиц, инфицированных вирусом иммунодефицита человека;

Научные работники, специалисты, служащие и рабочие научно - исследовательских учреждений, предприятий (производств) по изготовлению медицинских иммунобиологических препаратов и других организаций, работа которых связана с материалами, содержащими вирус иммунодефицита человека;

Медицинские работники в стационарах (отделениях) хирургического профиля при поступлении на работу и в дальнейшем 1 раз в год;

• Лица, проходящие военную службу и поступающие в военные учебные заведения и на военную службу по призыву и контракту, при призыве на срочную военную службу, при поступлении на службу по контракту, при поступлении в военные ВУЗы министерств и ведомств, устанавливающих ограничения для приёма на службу лиц с ВИЧ-инфекцией;

• Иностранные граждане и лица без гражданства при обращении за получением разрешения на гражданство или видом на жительство, или разрешением на работу в Российской Федерации, при въезде на территорию Российской Федерации иностранных граждан на срок более 3-х месяцев.

• Мужья, половые партнеры всех женщин, поставленных на учет по беременности

• Дети, рожденные матерями, не обследованными на ВИЧ во время беременности и дети, рожденные ВИЧ-инфицированными матерями и/или получавшие грудное вскармливание от ВИЧ-инфицированной женщины.

• Лица, употреблявшие психоактивные вещества.

• Внутренние трудовые мигранты, включая работающих вахтовым методом.

• Лица, находящиеся в местах лишения свободы.

• Пациенты с рядом клинических показаний, указывающих на наличие ВИЧ.

• Пациенты с подозрением или подтвержденным диагнозом: наркомании, инфекций, передаваемых половым путем, гепатита В, С, легочного и внелегочного туберкулеза.

• Уязвимые группы населения: гомо- и бисексуалы, работники коммерческого секса, клиенты работников коммерческого секса, лица с беспорядочными половыми связями (промискуитет), лица, находящиеся в местах лишения свободы.

• Реципиенты препаратов крови.

• Лица, имеющие половые контакты с ВИЧ-инфицированными или больными инфекциями, передающимися половым путем.

• Работники системы здравоохранения, получившие микротравмы при выполнении профессиональных обязанностей.

• Пациенты, при оказании помощи которым был травмирован медицинский работник.

• Члены семей ВИЧ-инфицированных пациентов.

ПОМНИТЕ: Согласие или отказ от тестирования на ВИЧ не должны влиять на качество оказания медицинской помощи.

• Положительный результат теста означает, что у человека обнаружены антитела к ВИЧ. Это дает основание полагать, что человек ВИЧ-инфицирован. Необходима консультация врача.

• Неопределенный (сомнительный) результат теста: необходимо провести повторные исследования на антитела к ВИЧ иммунном или линейном блоте через 2 недели, 3 и 6 месяцев. Если получены отрицательные результаты в ИФА, то дальнейшее исследование не требуется. Если через 6 месяцев после первого обследования вновь будут получены неопределенные результаты, а у пациента не будут выявлены факторы риска заражения и клинические симптомы ВИЧ-инфекции, результат расценивается как ложноположительный. При этом при наличии эпидемиологических и клинических показаний исследования проводятся повторно по назначению лечащего врача или эпидемиолога. Пока окончательный результат тестирования на ВИЧ неизвестен рекомендации в отношении изменения поведения такие же, как и для лиц с положительным результатом тестирования.

Результаты исследования не сообщаются по телефону, а только при личной беседе с обследуемым.

Скрининговые и подтверждающие тесты. Иммуноблоттинг, ИФА и ПЦР. Точность экспресс-тестов и адреса для анонимного тестирования.

У каждого есть ВИЧ-статус, только у одних он положительный, а у других — отрицательный. Однако знать его необходимо каждому!

Для диагностики вируса иммунодефицита человека существует несколько видов тестов.

Они помогают заподозрить инфекцию, но их результаты надо подтверждать другими анализами. Для скрининга используют тесты либо на антитела, либо на антигены/антитела.

ИФА (иммуноферментый анализ).

Этот метод служит не для обнаружения самого вируса, а антител, которые наша иммунная система вырабатывает для борьбы с ним.

Существует несколько поколений ИФА:

• В первом поколении тестов использовался сам вирус, обработанный ультразвуком, при этом определялись антитела только ВИЧ-1. Анализ обладал невысокой чувствительностью и специфичностью.

• ИФА второго поколения научили определять антитела как к ВИЧ-1, так и к ВИЧ-2. Материалом служили синтезированные белки, аналогичные настоящим антигенам вируса. Впрочем, тесты первого и второго поколения давно не используются.

• Следом появились тесты третьего поколения, которые позволяют диагностировать длительно текущую (хроническую) ВИЧ-инфекцию с чувствительностью и специфичностью около 100 %. Однако при острой ВИЧ-инфекции (когда антител мало или совсем нет) их точность считается недостаточной.

За счет своей простоты и дешевизны этот метод используется чаще всего, в том числе на его основе работают экспресс-тесты.

Как следует из названия, они позволяют наверняка убедиться в наличии или отсутствии вируса иммунодефицита у человека. Их минус в сложности и дороговизне.

Иммуноблоттинг помогает проверить результаты скрининговых анализов и уточнить, каким видом вируса инфицирован человек: ВИЧ-1, ВИЧ-2 или обоими. Этот метод обладает высокой точностью, чувствительностью, но дорог и сложен в исполнении. Он является комбинацией ИФА и электрофореза, что позволяет определить антитела к специфическим антигенам ВИЧ-1 (gp160, gp120, gp41).

ПЦР (полимеразная цепная реакция). Тест способен находить генетический материал ВИЧ (ДНК/РНК), то есть проверяет, есть ли непосредственно вирус в крови. Нуклеиновые кислоты могут обнаруживаться уже на 7-й день после инфицирования (по данным CDC — c 10 по 33 день).

Кроме того, ПЦР бывает качественным и количественным. В последнем случае можно отслеживать вирусную нагрузку (концентрацию вируса в крови и других биологических жидкостях) у людей с ВИЧ, оценивая эффект терапии.

А я могу сдать сразу иммуноблот или ПЦР, чтобы узнать свой ВИЧ-статус?

Иммуноблот используют специальные лаборатории центров по борьбе со СПИДом. Пробы крови направляются туда для перепроверки уже положительных первичных скрининговых анализов. Сразу сдать его не получится, даже в платных клиниках.

ПЦР, наоборот, можно сдать в любой момент, но только обратившись в коммерческую лабораторию. В СПИД-центрах его делают также для перепроверки ранее положительного теста. Да, ПЦР позволяет максимально быстро (в течение 7—10 дней после инфицирования) обнаружить ВИЧ, но и у него есть недостатки:

• может обнаружить только ВИЧ-1;

• в редких случаях выявление низких уровней РНК ВИЧ (например, у человека есть подозрение на острую ВИЧ-инфекцию (высокий риск инфицирования) или в период серологического окна;

• новорожденным от ВИЧ-положительных матерей

Как тогда правильно проверяться на ВИЧ?

Нужно ли повторно тестироваться, если результат анализа отрицательный?

Универсальной рекомендации, увы, нет. Повторные тесты нужны чтобы застраховаться от попадания в период окна, когда в крови еще нет антител и антигенов ВИЧ, а вирус уже проник в организм.

То же самое и с частотой тестирования — она зависит от разных факторов: количества рисков, нахождения в группах риска (инъекционные наркопотребители, секс-работники, мужчины, практикующие секс с мужчинами). Однако эксперты рекомендуют проверяться каждые 6—12 месяцев.

Анализ на ВИЧ может дать неправильные результаты в следующих случаях:

• при наличии системных аутоиммунных заболеваний (коллагенозов, васкулитов) и злокачественных опухолей;

• при тестировании в период серологического окна — когда в крови еще не появились антитела к ВИЧ;

• из-за ошибки при проведении теста в лаборатории;

• после вакцинации от гриппа.

У детей, рожденных от ВИЧ-положительных матерей, до восемнадцатимесячного возраста в крови могут сохраняться материнские антитела, что может приводить к ложноположительным результатам.

На результаты теста не влияют прием пищи и алкоголя или курение. Специальной подготовки перед сдачей анализов на ВИЧ не требуется.

А что с экспресс-тестами?

Они позволяют провериться на ВИЧ, не посещая лабораторию или поликлинику. По сути, это тесты ИФА третьего поколения, которые определяют антитела к ВИЧ-1 и ВИЧ-2 в слюне, моче или крови.

Точность большинства экспресс-тестов при хронической (длительно текущей) ВИЧ-инфекции достаточно высока (> 99 % чувствительности и специфичности), но все равно чуть ниже лабораторных анализов.

Сегодня среди них наиболее популярны тесты слюны (или околодесневой жидкости) и крови. Их можно либо купить самому, либо получить бесплатно в ВИЧ-сервисных организациях.

Важно помнить! Если такой тест оказался положительным, результат необходимо как можно быстрее перепроверить более точным методом.

Анализ на ВИЧ бесплатный и анонимный, прикрепление к поликлинике и регистрация не требуются. После сдачи теста выдается идентификационный номер, по которому можно будет узнать результат.

ПРАВА ПАЦИЕНТОВ

к приказу департамента

здравоохранения и фармации

от 21.07.2009 г. № 834

МЕТОДИЧЕСКОЕ ПИСЬМО

ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕЦИИ

Стандартным методом диагностики ВИЧ-инфекции служит определение антител к ВИЧ с помощью ИФА. Метод широко используется для скрининга на наличие антител к ВИЧ, обладает высокой чувствительностью (более 99,5%) и пригоден для исследования большого числа образцов. Принцип иммуноферментного анализа основан на выявлении комплекса антиген-антитело с помощью фермента (пероксидаза, щелочная фосфатаза и др.) по изменению окраски специфического субстрата.

Новое поколение комбинированных ИФА-тестов одновременно выявляет антиген и антитела. Их преимуществом является сокращение времени, необходимого для анализа, снижение трудозатрат и большая экономичность по сравнению с тем, когда каждый из анализов выполняется индивидуально.

Быстрые тесты

Быстрые тесты для определения специфических антител к ВИЧ – это тесты, которые можно выполнить менее чем за 30 минут. При правильном использовании быстрые тесты на антитела к ВИЧ являются точными и имеют широкое распространение:

- трансплантология (перед забором материала),

- эпидемиологический надзор (обследование труднодоступных групп населения);

- обследование крови в случае экстренного переливания препаратов крови и отсутствия обследованной на антитела к ВИЧ крови;

- тестирование на ВИЧ, если требуется немедленное начало медикаментозной профилактики ВИЧ в случае аварийной ситуации;

- тестирование беременных женщин с неизвестным ВИЧ-статусом в предродовом периоде.

Виды быстрых тестов:

- Мембранные устройства для концентрации иммунного материала.

- Иммунохроматографический метод (латеральная диффузия).

Иммунный блот

Иммунный блот (ИБ) представляет собой наиболее широко применяемый подтверждающий метод для выявления антител к ретровирусам. Принцип метода заключается в выявлении антител к определенным белкам вируса, иммобилизованным на нитроцеллюлозную мембрану.

Сбор, хранение и транспортировка образцов для проведения исследования

Диагностический алгоритм тестирования на наличие антител к ВИЧ Обнаружение антител к ВИЧ включает два этапа:

I этап (скриниговая лаборатория) - выявление суммарного спектра антител против антигенов ВИЧ с использованием различных тестов (иммуноферментных, агглютинационных, комбинированных, гребеночных, мембранно-фильтрационных или мембранно-диффузных).

Если получен положительный результат, анализ проводится последовательно еще 2 раза с той же сывороткой и в той же тест-системе. Если при этом был получен еще хотя бы один положительный результат (два положительных результата из трех постановок в ИФА) сыворотка считается первичноположительной и направляется в референс-лабораторию для дальнейшего исследования.

II этап (референс-лаборатория). В референс-лаборатории первичноположительная сыворотка повторно исследуется в ИФА в другой (второй) тест-системе, выбранной для подтверждения. При получении положительного результата анализа и во второй тест-системе сыворотку необходимо исследовать в ИБ.

При получении отрицательного результата анализа и во второй тест-системе сыворотка повторно исследуется в третьей тест-системе. В случае получения отрицательного результата анализа во второй, и в третьей тест-системе выдается заключение об отсутствии антител к ВИЧ. При получении положительного результата в третьей тест-системе сыворотка направляется на исследование в ИБ.

Результаты, полученные в подтверждающем тесте (ИБ), интерпретируются как:

- положительные (позитивные) – это пробы, в которых обнаруживаются антитела к 2 или 3 гликопротеинам ВИЧ. При получении положительного результата делается заключение о наличии в исследуемом материале антител к ВИЧ.

- отрицательные (негативные) – это пробы, в которых не обнаруживается антител ни к одному из антигенов (белков) ВИЧ или имеется слабое реагирование с белком р18. При получении отрицательного результата выдается заключение об отсутствии в исследуемом материале антител к ВИЧ.

- неопределенные (сомнительные) – пробы, в которых обнаруживаются антитела к одному гликопротеину ВИЧ и/или каким-либо протеинам ВИЧ. При получении неопределенного результата проводятся повторные исследования на антитела к ВИЧ в зависимости от белкового профиля.

При возможности используют дополнительные методы диагностики (определение р24 антигена или ПЦР исследования). Если был выявлен антиген р24 или ДНК/РНК ВИЧ, повторное обследование на наличие антител проводится через 2 недели и далее через каждые 2 недели до получения положительного результата в подтверждающем тесте.

ПЕРЕЧЕНЬ КЛИНИКО-ДИАГНОСТИЧЕСКИХ ЛАБОРАТОРИЙ, ПРОВОДЯЩИХ ИММУНОФЕРМЕНТНЫЕ АНАЛИЗЫ (ИФА) НА ВИЧ И ПРИКРЕПЛЕННЫХ К НИМ ЛЕЧЕБНО-ПРОФИЛАКТИЧЕСКИХ УЧРЕЖДЕНИЙ

ЛПУ, прикрепленные к лаборатории

Клинико-диагностическая лаборатория ГУЗ ЯО Центр СПИД

ЛПУ г. Ярославля, областные лечебно-профилактические учреждения, Ярославская ЦРБ

Ярославская ЦРБ, Большесельская ЦРБ,

Борисоглебская ЦРБ, Гаврилов-Ямская ЦРБ,

Даниловская ЦРБ, Любимская ЦРБ,

Некоузская ЦРБ, Некрасовская ЦРБ,

Пречистенская ЦРБ, Пошехонская ЦРБ,

Иммунологическая лаборатория диагностики СПИД Ростовская ЦРБ

Клинико-диагностическая лаборатория диагностики ВИЧ-инфекции МУЗ Угличская ЦРБ

Угличская ЦРБ, Брейтовская ЦРБ,

Клинико-диагностическая лаборатория диагностики ВИЧ-инфекции Городской больницы города Переславля-Залесского

Городская больница города Переславля-Залесского, Переславский муниципальный район

Донорская кровь, заготовленная в выездных условиях и в стационарах Ярославской области, а также от отделений заготовки крови и её компонентов (ОЗК) №1, №2, №3

Общие правила при подготовке к исследованию крови: желательно соблюдать эти правила при проведении биохимических, гормональных, гематологических тестов, комплексных иммунологических тестов, результаты зависимы от физиологического состояния человека.

По возможности, рекомендуется сдавать кровь утром, в период с 8 до 11 часов, натощак (не менее 8 часов и не более 14 часов голода, питье – вода, в обычном режиме), накануне избегать пищевых перегрузок.
Если вы принимаете какие-то лекарственные препараты, следует проконсультироваться с врачом по поводу целесообразности проведения исследования на фоне приёма препаратов или возможности отмены приёма препарата перед исследованием, длительность отмены определяется периодом выведения препарата из крови.
Алкоголь – исключить приём алкоголя накануне исследования.
Курение — не курить минимально в течение 1 часа до исследования.
Исключить физические и эмоциональные стрессы накануне исследования.
После прихода в медицинский офис рекомендуется отдохнуть (лучше — посидеть) 10-20 минут перед взятием проб крови.
Нежелательно сдавать кровь для лабораторного исследования вскоре после физиотерапевтических процедур, инструментального обследования и других медицинских процедур. После некоторых медицинских процедур (например, биопсия предстательной железы перед исследованием ПСА) следует отложить лабораторное обследование на несколько дней.
При контроле лабораторных показателей в динамике рекомендуется проводить повторные исследования в одинаковых условиях: в одной лаборатории, сдавать кровь в одинаковое время суток и пр.
Для ряда тестов есть специальные правила подготовки к исследованию, с которыми можно ознакомиться в лаборатории

Биохимические исследования

Забор крови для биохимических исследований производится натощак венопункцией локтевой вены в вакуумную пробирку с красной крышкой, для исследований глюкозы — в пробирку с серой крышкой. Для таких исследований как глюкоза, тест толерантности к глюкозе, липидный спектр (холестерин, триглицериды, альфа — холестерин) обязательно 12-часовое голодание. Кровь может храниться в холодильнике при температуре +4 — +8 С 12 часов.

Гематологические исследования

Забор крови для гематологических исследований желательно проводить утром натощак венопункцией локтевой вены в вакуумную пробирку с сиреневой крышкой.
Кровь может храниться в холодильнике при температуре +4 — +8 С 6 часов.

Коагулогические исследования

Забор крови для коагулогических исследований проводится в процедурном кабинете строго натощак с 8 до 10 часов утра понедельник-пятница, и с 9 до 10-30 по выходным.

Изосерологические исследования

Забор крови для серологических исследований ( группа крови, резус-фактор) производится натощак венопункцией локтевой вены в вакуумную пробирку с сиреневой крышкой. Кровь может храниться в холодильнике при температуре +4 — +8 С 12 часов.

Исследование мочи

Перед сбором мочи проводится тщательный туалет наружных половых органов (мыльным раствором с последующим обмыванием кипячёной водой или 0.02% раствором фурациллина (5 таблеток на 0.5 л кипячёной воды). Кожа перед сбором мочи должна быть сухой!!
Сбор мочи проводят при свободном мочеиспускании в чистую, сухую, бесцветную, широкогорлую посуду.
Собирать среднюю порцию мочи: начать мочеиспускание в унитаз; через 2-3 секунды подставить контейнер для сбора анализа; после наполнения контейнера на 2/3-3/4 объёма продолжить мочеиспукание в унитаз. Плотно закрыть посуду крышкой, разборчиво надписать свою фамилию и инициалы, дату и время сбора анализа.
С момента сбора мочи до доставки ее в лабораторию должно пройти не более 3-х часов.

Нельзя допускать:
1. Накануне нежелательно принимать лекарственные вещества, в том числе витамины (при необходимости приёма лекарств посоветуйтесь с врачом).
2. Не допускать замораживания мочи при транспортировке.
3. Не хранить более 3-х часов перед сдачей анализа в лабораторию.
8.Нельзя брать мочу из судна и горшка.
Помните, что получение достоверных результатов предполагает правильный сбор материала для анализа. Несоблюдение правил подготовки к сдаче материала для исследования, в лучшем случае, приведет к необходимости повторения анализа, в худшем — к неправильной постановке диагноза со всеми вытекающими отсюда последствиями. Поэтому, внимательно ознакомьтесь с данной памяткой.

Проба Зимницкого: в течение суток каждые 3 часа (8 раз) собирается моча в одноразовые контейнеры, которые хранятся в холодильнике, либо в другом прохладном месте.

Моча суточная

Для лабораторных исследований утром перед сбором мочи провести туалет наружных половых органов.
Первую утреннюю порцию мочи не собирают, но отмечают время мочеиспускания; в дальнейшем собирают всю мочу, выделяемую за 24 часа от отмеченного времени первого мочеиспускания до того же часа через сутки.
Сбор суточной мочи оптимально проводить в специализированный градуированный пластиковый контейнер или стеклянную банку на 2,0-3.0 л, имеющий широкую горловину и рельефную ручку; контейнер безопасен и удобен в обращении.
Мочиться следует непосредственно в контейнер, после каждого мочеиспускания плотно завинчивать крышку.
Мочу следует хранить в закрытом контейнере в холодильнике на нижней полке, не допуская замораживания.

По окончании сбора (последнее мочеиспускание производится в тоже время, которое отмечено как время первого мочеиспускания, но через сутки) мочу можно сдать в лабораторию двумя способами:

Моча по Нечипоренко. Сдается средняя порция свободно выпущенной утренней мочи в одноразовый мочевой контейнер после тщательного туалета наружных половых органов.

Исследования кала

Кал собирается после самопроизвольной дефекации в специально предназначенный контейнер. Допустимо фекалии забирать из предварительно продезинфицированного сухого горшка или подкладного судна. Пробу в количестве 1 грамма (примерно) отдельным наконечником с аэрозольным барьером или одноразовыми лопатками переносят в специальный стерильный флакон.
Собирать кал для исследования следует утром. Если это затруднительно, можно подготовить пробу заранее, но не более чем за 8 часов перед сдачей кала в лабораторию. В этом случае следует хранить пробу в холодильнике (не замораживать). Если планируется исследование кала на наличие скрытой крови, то за три дня исключить из рациона мясо, рыбу, зеленые овощи и помидоры.

Нельзя допускать:
1. Нельзя проводить исследования кала раньше чем через 2 дня после клизмы, рентгенологического исследования желудка и кишечника, колоноскопии.
2. Нельзя накануне принимать лекарственные вещества в том числе:
-слабительные; активированный уголь;
— препараты железа, меди, висмута;
— использовать ректальные свечи на жировой основе.
3. Не допускать попадания в образец мочи или воды.
4. Проводить исследование кала у женщин во время менструации

Кал на копрограмму собирается после соблюдения диеты Певзнера в течение 3-4-х дефекаций: 400г. Хлеба, 250 г. мяса, 100г. масла, 40г. сахара, гречневая и рисовая каша, картофель, салат, квашеная капуста, компот из сухофруктов, свежие яблоки — на 1 день.

Для того, чтобы результаты тестирования были правильными, а также не потребовался повторный забор проб, следует соблюдать условия забора и транспортировки биоматериала. Важно, что для интерпретации результатов исследований во многих случаях необходимы клинические данные пациента. Необходимо к образцам приложить не только направление, но и краткую выписку из истории болезни, копию снимков МРТ головного мозга.

С каждым годом в лаборатории появляются новые возможности бесплатно проводить исследования в рамках научных тем, о результатах которых мы сообщаем семьям. Просим в направлении указывать точные номера телефонов и почтовые адреса, чтобы была возможность оперативно связаться с семьей.

До забора крови очень важно ознакомиться с правилами забора биоматериала.

Время и условия забора биоматериала

Если в описании анализа не указано другое, забор материала рекомендовано производить в утренние часы. В заборе крови натощак для проведения анализов, как правило, нет необходимости, в большинстве случаев кровь берут через 40 минут после еды. В некоторых случаях врач может рекомендовать сдать кровь на анализ аминокислот и ацилкарнитинов натощак. Также может потребоваться соблюдение определенной диеты.

Техника забора крови в пробирки

Предпочтительна венозная кровь.

Забор крови в вакутейнер производится по стандартной технологии.

Переливание крови из шприца в пробирку с антикоагулянтом осуществляется СТРОГО ПОСЛЕ снятия иглы со шприца во избежание разрушения клеточных мембран. Пробирку с кровью необходимо плотно закрыть крышкой и аккуратно перевернуть несколько раз, НО НЕ ВЗБАЛТЫВАТЬ.

Если забор крови будет производиться из катетера, рекомендовано подождать не менее часа после установки нового катетера, только тогда проводить забор крови.

Техника забора крови на карточку-фильтр

Кровь берется из пальца или вены.

На стандартной карточке-фильтр нарисованы круги, все круги должны быть пропитаны кровью насквозь. Дать крови полностью высохнуть, держа карточку на чистой поверхности при комнатной температуре. Пятна крови на фильтровальной бумаге должны быть сухими, четкими, не смазанными.

ОБРАЗЕЦ КРОВИ ВКЛАДЫВАЕТЕ В ЧИСТЫЙ КОНВЕРТ, ЛИБО В ЧИСТЫЙ ФАЙЛ.

ОБРАЗЕЦ КРОВИ НЕ ДОЛЖЕН СОПРИКАСАТЬСЯ С ГРЯЗНОЙ ПОВЕРХНОСТЬЮ И ОБРАЗЦАМИ ДРУГИХ ПАЦИЕНТОВ.

Пробирки, фильтры

Для проведения исследований требуются пробирки с разными консервантами

Пробирки с ЭДТА

Пробирки с Гепарином

Фильтр №903

Стерильный контейнер для сбора мочи

Мочесборники для новорожденных

Подпись пробирок и контейнеров

Подпись пробирок осуществляется СРАЗУ после забора крови лично медицинским персоналом. Каждую пробирку и контейнер с биоматериалом необходимо подписать. Для этого можно использовать шариковую ручку, перманентный стойкий к воде тонкий маркер. Проверьте, не стирается ли надпись при намокании. На пробирке указывается:

Ф.И.О.пациента, и его родство, если необходимо (отец, мать, пробанд и т.п.)
Дата взятия материала.
Время взятия материала.
Консервант (ЭДТА, гепарин и т.п.), если не указано производителем на пробирке.

Внимание! Пишите разборчиво! Если на пробирке не помещается вся информация полностью, подпись можно сокращать, подробное описание пробирок можно приложить на отдельном листе бумаги и вложить в посылку с пробирками.

Контроль качества биоматериала

Если кровь свернулась, гемолизирована или ее не достаточно, обязательно обратитесь в лабораторию по телефону или по электронной почте и выясните, годится ли такой материал для конкретного анализа. Чаще всего для анализа лизосомных ферментов и ДНК-диагностики такая кровь не пригодна. В некоторых случаях вам могут предложить альтернативные способы взятия биоматериала. Биоматериал не надлежащего качества будет немедленно утилизирован лабораторией. Внимательно читайте условия доставки биоматериала.

Доставка биоматериала

Доставка образцов должна производиться как можно быстрее (см.требования ниже). Пробирки и контейнеры с биоматериалом помещают в термоконтейнеры или в обычные термосы . Необходимо обеспечить плотное закрытие контейнера, пробирки не должны свободно болтаться и грохотать. Соблюдайте температурный режим (см.описание ниже). Вместе с биоматериалом ОБЯЗАТЕЛЬНО прилагается направление на исследование (см.образцы направлений на сайте) и краткая выписка из истории болезни пациента.

Биоматериал без направлений анализироваться лабораторией не будет.

Ферментная диагностика

Определение активности ферментов В ПЯТНАХ ВЫСУШЕННОЙ КРОВИ методом тандемной масс-спектрометрии. Исследование выполняется при подозрении на:

болезнь Гоше, болезнь Фабри, болезнь Краббе, Ниманна-Пика тип А/В, болезнь Помпе, , муколипидоз, Ганглиозидоз GM1, МПС1, МПС2, МПС3В, МПС4А, МПС6, НЦЛ2. (см.пункты прейскуранта 3.191 (скрининг на ЛБН-1), 3.197 (скрининг на ЛБН-2, включает только измерение хитотриозидазы и кислой липазы), 3.284 (скрининг на ЛБН-3), 3.292 (Ганглиозидоз GM1).

Определение активности ферментов В ЛЕЙКОЦИТАХ И ПЛАЗМЕ КРОВИ. Исследование выполняется при подозрении на: Ганглиозидоз GM1 тип 1,2,3 (beta-D-галактозидаза), Зандхоффа болезнь (Гексозаминидаза (тотальная), Маннозидоз альфа (alpha-D-маннозидаза), Маннозидоз бета (beta-D-маннозидаза), Метахроматическая лейкодистрофия (Арилсульфатаза А), Множественная сульфатазная недостаточность (Арилсульфатаза А, Идуронатсульфатаза), Муколипидоз II, III типа (Гексозаминадаза, N-ацетил-a-D-глюкозаминидаза, beta-D-галактозидаза, a-D-маннозидаза), Мукополисахаридоз I типа (a-L-идуронидаза), Мукополисахаридоз II типа (Идуронатсульфатаза),Мукополисахаридоз VI типа (Арилсульфатаза В), Мукополисахаридоз VII типа (β-D-глюкуронидаза), Тея-Сакса болезнь (Гексозаминидаза А), Фукозидоз (beta-D-фукозидаза).

7-10 мл крови пациента и родителей (через 40 минут – 1 час после еды) собирают в пробирку с гепарином (как правило, зеленая крышка) или с ЭДТА (как правило, фиолетовая крышка). Переливание крови из шприца в пробирку осуществляется СТРОГО ПОСЛЕ снятия иглы со шприца во избежание разрушения клеточных мембран. Пробирку необходимо плотно закрыть крышкой и аккуратно перевернуть вниз-вверх несколько раз. Пробирку с кровью НЕ ВЗБАЛТЫВАТЬ, чтобы не возникло гемолиза, пробирку подписать. Кровь перевозить в термосе с пищевым льдом (1-2 кубика льда). Кровь должна быть доставлена в лабораторию не позже чем через 24 часа после забора. Кровь нельзя замораживать. Если невозможно прислать кровь в указанные сроки, напишите нам письмо, в зависимости от анализа можно предложить другие варианты доставки и сбора биоматериала.

Определение активности галактозо-1-фосфат уридилтрансферазы в крови (галактоземия тип 1)

1мл крови пациента и родителей собирается в пробирки с гепарином (как правило, зеленая крышка). Содержимое пробирок необходимо перемешать, но не встряхивать, чтобы не возникло гемолиза, пробирки закрыть и подписать. Кровь перевозить в термосе с пищевым льдом (1-2 кубика льда на термос). Кровь должна быть доставлена в лабораторию не позже чем через 24 часа после забора. Кровь нельзя замораживать. В направлении обязательно указать, если пациенту проводилось переливание крови или ее компонентов, а также дату этой процедуры.

Исследование метаболитов в крови

Определение аминокислот и ацилкарнитинов в крови методом тандемной масс-спектрометрия

Кровь собирается на стандартную карточку-фильтр (№903), которую применяют для скрининга новорожденных на фенилкетонурию. Кровь может быть как капиллярная (из пальца), так и венозная. Необходимо хорошо пропитать выделенную область на фильтре! На карточке-фильтре обязательно должно быть четко указаны ФИО, кем и откуда направлен пациент, дата рождения, дата взятия образца и телефон лечащего врача. Образец высушивается 2-3 часа при комнатной температуре (нагревать и подвергать образец прямому воздействию солнечных лучей недопустимо) и отправляется в лабораторию с заполненным направлением. Желательно приложить выписку из истории болезни.

Определение оксистеролов в плазме крови (болезнь Ниманна-Пика тип С)

Для определения оксистеролов в плазме крови необходимо строгое соблюдение правил транспортировки биоматериала. 5-7 мл крови пациента собрать в пробирку с консервантом ЭДТА (как правило, фиолетовая крышка), несколько раз аккуратно перевернуть пробирку для перемешивания с консервантом, но не встряхивать во избежание гемолиза. Четко и разборчиво подписать Фамилию Имя Отчество пациента и дату забора крови. Доставлять пробирку с кровью в течение 24 часов при температуре +2-+8 градусов Цельсия, ни в коем случае не замораживать! Кровь перевозить в термосе с пищевым льдом (1-2 кубика льда) или в контейнере с хладоэлементом.

Если кровь невозможно доставить в течение 24 часов необходимо произвести дополнительные манипуляции с кровью в лаборатории, в которой проводится ее забор. После перемешивания с консервантом пробирку необходимо центрифугировать 10 минут при 1000g. После центрифугирования отобрать плазму (надосадочную жидкость) в пробирку типа Эппендорф (если возможно, в две пробирки), не задевая осадок! Далее кровь и пробирки с плазмой необходимо заморозить и возможно хранить при -20 градусах Цельсия. Отправлять такие образцы необходимо в замороженном виде.

Изофокусирование трансферринов (диагностика врожденных нарушений гликозилирования)

2-3 мл крови пациента собирают либо в пробирку БЕЗ КОНСЕРВАНТА (как правило красная крышка), либо в пробирку С ГЕПАРИНОМ (как правило, зеленая крышка). Содержимое пробирки необходимо перемешать, но не встряхивать, чтобы не возникло гемолиза, пробирку закрыть и подписать. Кровь перевозить в термосе с пищевым льдом (1-2 кубика льда). Кровь должна быть доставлена в лабораторию не позже чем через 24 часа после забора. Кровь нельзя замораживать! Желательно приложить выписку из истории болезни.

Если кровь невозможно доставить в течение 24 часов необходимо, произвести дополнительные манипуляции с кровью в лаборатории, в которой проводится ее забор. После перемешивания с консервантом пробирку необходимо центрифугировать 10 минут при 1000g. После центрифугирования отобрать сыворотку/плазму (надосадочную жидкость) в пробирку типа Эппендорф (если возможно, в две пробирки), не задевая осадок! Далее сыворотку/плазмой необходимо заморозить и возможно хранить при -20 градусах Цельсия. Отправлять такие образцы необходимо в замороженном виде.

Определение церулоплазмина (диагностика болезни Вильсона-Коновалова и болезни Менкеса)

2-3 мл крови пациента собирают в пробирку без консерванта (как правило красная крышка). Содержимое пробирки необходимо перемешать, но не встряхивать, чтобы не возникло гемолиза, пробирку закрыть и подписать. Кровь перевозить в термосе с пищевым льдом (1-2 кубика льда). Кровь должна быть доставлена в лабораторию не позже чем через 24 часа после забора. Кровь нельзя замораживать. Желательно приложить выписку из истории болезни.

Если кровь невозможно доставить в течение 24 часов, необходимо произвести дополнительные манипуляции с кровью в лаборатории, в которой проводится ее забор. После перемешивания с консервантом пробирку необходимо центрифугировать 10 минут при 1000g. После центрифугирования отобрать плазму (надосадочную жидкость) в пробирку типа Эппендорф (если возможно, в две пробирки), не задевая осадок! Далее кровь и пробирки с плазмой необходимо заморозить и возможно хранить при -20 градусах Цельсия. Отправлять такие образцы необходимо в замороженном виде.

Определение очень длинноцепочечных жирных кислот, изомеров холестерина (диагностика пероксисомных заболеваний, синдрома Смита-Лемли-Опитца)

5-7 мл крови пациента и родителей (натощак) собирают в пробирку с консервантом (ЭДТА). Содержимое пробирки необходимо перемешать, пробирку закрыть и подписать. Рекомендуется за 3 дня до анализа не употреблять в пищу бананы, орехи, шоколад и сыр. Кровь перевозить в термосе с пищевым льдом. Кровь должна быть доставлена в лабораторию не позже чем через сутки после взятия.

Если кровь невозможно доставить в течение суток, необходимо произвести дополнительные манипуляции с кровью в лаборатории, в которой проводится ее забор. После перемешивания с консервантом пробирку необходимо центрифугировать 10 минут при 1000g. После центрифугирования отобрать плазму (надосадочную жидкость) в пробирку типа Эппендорф (если возможно, в две пробирки), не задевая осадок! Далее кровь и пробирки с плазмой необходимо заморозить и возможно хранить при -20 градусах Цельсия. Отправлять такие образцы необходимо в замороженном виде.

Исследование метаболитов в моче

Определение органических кислот методом хромато масс-спектрометрии

Для исследования необходима порция утренней мочи (10-15мл) в стерильном герметичном контейнере. За 3 суток до сбора мочи желательно не употреблять в пищу фрукты, соки, варенье, шоколад, кофе, какао, конфеты. По возможности исключить обильное питье на ночь. Если пациент находится на искусственном вскармливании, необходимо в сопроводительном письме указать принимаемые смеси.

Для детей моложе 4 лет предоставить в лабораторию порцию утренней и дневной мочи в отдельных контейнерах, контейнеры подписать.

После забора мочи рекомендуется добавить в каждую порцию 2 капли хлороформа или заморозить. Перед перевозкой убедиться в герметичности контейнера. Перевозить контейнер в термосе при температуре +2 - +8 градусов Цельсия. При длительной транспортировке (более 12 часов) образец необходимо заморозить (при -20С).

Мочу можно хранить в замороженном состоянии 1-2 дня до доставки в лабораторию.

Определение гликозаминогликанов в моче (электрофорез ГАГ и количественный анализ ГАГ)- мукополисахаридозы вне зависимости от типа

Для исследования необходима порция утренней мочи (10-15мл) в стерильном герметичном контейнере. На ночь перед сбором мочи пациент не должен употреблять большое количество жидкости.

На контейнере с мочой необходимо разборчиво подписать дату забора, фамилию и имя пациента.

Перед перевозкой убедиться в герметичности контейнера. Перевозить контейнер в термосе при температуре +2 - +8 градусов Цельсия. При длительной транспортировке (более 12 часов) образец необходимо заморозить (при -20С).

Мочу можно хранить в замороженном состоянии 1-2 дня до доставки в лабораторию.

ДНК-диагностика

При направлении на ДНК-диагностику обязательно присылать кровь ребенка и родителей. Желательно прилагать к направлению полные клинические данные пациента, выписку из истории болезни, копии снимков МРТ головного мозга и т.д.

ДНК-диагностика митохондриальных заболеваний

Для исследования на частые мутации мтДНК, делеции мтДНК необходимо предоставить в лабораторию 2-3 мл венозной крови в пробирке с ЭДТА, а также обязательно порцию утренней мочи в герметичном стерильном контейнере.

Пробирки необходимо четко и разборчиво подписать, перевозить в термосе с пищевым льдом (1-2 кубика льда). Кровь должна быть доставлена в лабораторию не позже чем через 24 часа после забора.

ДНК-диагностика и технологии секвенирования нового поколения.

Для проведения исследований генов (частые мутации, полный анализ генов) необходимо произвести забор крови 3-5мл в пробирку с консервантом ЭДТА (как правило, фиолетовая крышка). Пробирку с кровью необходимо несколько раз аккуратно перевернуть для перемешивания с консервантом, подписать четко и разборчиво Фамилию Имя Отчество и дату забора крови. Кровь перевозить в термосе с пищевым льдом при температуре +2-+8 градусов или в контейнере с хладоэлементом. Если нет возможности доставить материал в течение 24 часов, образцы можно заморозить (-20 градусов) и переслать в удобное время.

Если невозможно прислать кровь в указанные сроки, в необходимых пробирках, напишите нам письмо, в зависимости от анализа можно предложить другие варианты доставки и сбора биоматериала, например на карточке-фильтре.

Пренатальная диагностика (биопсия Ворсин Хориона)

В качестве плодного материала для проведения биохимической и молекулярно-генетической диагностики используют биоптат хориона ( на сроке 9-11 недель), клетки и амниотическую жидкость (16-21 неделя) или плодную кровь. Ворсины хориона предпочтительный материал для исследования, поскольку возможна ранняя диагностика заболевания у плода. Ворсины хориона должны быть помещены в специальную среду. Флакон должен быть подписан фамилией матери и приложено направление на диагностику по стандартной форме направления на исследования.

Также необходимо приложить кровь беременной женщины и супруга, что необходимо для проведения оценки чистоты биоматериала.

При наступлении беременности необходимо связаться с лабораторией для определения тактики диагностики

Внимание!

Забор биоматериала проводится в специализированных учреждениях.

В медико-генетической консультации вашего региона необходимо получить информацию об учреждениях, которые проводят данную процедуру заранее, и подготовить необходимые для этого справки и направления.

Адреса центров в Москве в которых можно провести процедуры по забору биоматериала у плода:

Данный материал взят из книги “Диагностические тест-системы: Радиоиммунный и иммуноферментный методы диагностики” Таранова Анатолия Григорьевича и размещен на сайте с любезного разрешения автора.

ТЕХНИКА ЛАБОРАТОРНЫХ РАБОТ

2.1. Условия взятия и хранения биологического материала

Подготовка к проведению лабораторных исследований содержит два основных момента: необходимость соблюдения стандартных условий взятия биологического материала и предотвращение деградации биологически активного вещества в образцах.

Перед получением образца крови медицинскому работнику необходимо знать следующее:
1) некоторые биологические вещества, например гормоны, после приема пищи могут иметь повышенную концентрацию; ,
2) содержание ряда веществ подвержено влиянию циркадных (суточных) колебаний;

3) множество лекарственных веществ способны влиять на определяемые вещества, повышая или понижая их уровень в крови;

4) взятие исследуемого образца у пациентов в горизонтальном, в вертикальном положении или после физической нагрузки изменяет уровень биологически активных веществ иногда более чем на 10 %.

Желательно, чтобы кровь, предназначенная для исследования, забиралась в однотипные центрифужные пробирки. Такие пробирки должен готовить (мыть, высушивать, добавлять коагулянт или ингибитор ферментов) один сотрудник. Кровь без добавок отстаивают, а с добавками центрифугируют, полученную сыворотку или плазму разливают в такое количество мелких пластмассовых или стеклянных пробирок (стекло не всегда выдерживает низкую температуру), которое равно или превышает число разных типов тестирования.

В биохимической деятельности организма большую роль играют биологические ритмы. Пульсирующий характер секреции многих веществ от нескольких минут до суток - все это должно быть учтено при взятии биологического материала. Вне связи с временным фактором и конкретным физиологическим состоянием не существует абсолютных нормативных показателей вещества. Если не преследуется специальная цель исследовать циркадный ритм биологической активности, периферическую венозную или капиллярную кровь у пациентов желательно брать утром натощак в одно и то же время, в условиях физиологического покоя, что особенно важно при исследовании веществ, секреция и метаболизм которых протекает в течение суток неодинаково.

Во время процедуры взятия крови следует избегать гемолиза, который некоторым возможен при длительном венозном застое, энергичной аспирации крови шприцем, попадании в просвет иглы воды и детергентов, действии на кровь высокой и низкой температур.

2.1.1. Получение сыворотки или плазмы крови

Цельная кровь (капиллярная и венозная) используется в основном в биохимических исследованиях (определение глюкозы, показателей КЩР, определение концентрации электролитов в эритроцитах) и гематологии (исследование LE-клеток, гематокрита, на малярию, проведение стандартного клинического анализа крови). Для радиоиммуиных и иммуноферментных методов получают сыворотку или плазму.

Вопрос о том, что лучше брать для анализа - плазму или сыворотку - не имеет однозначного ответа. Некоторые исследователи предпочитают сыворотку, так как стероиды, например, из нее экстрагируются легче и полнее, чем из плазмы. Кроме того, плазма нередко образует эмульсию с органическими растворителями во время экстракции, а после замораживания и оттаивания в ней появляются хлопья фибрина, мешающие определению. Для биохимических исследований чаще используется сыворотка венозной крови, полученной у пациента при определенных условиях.

При выборе вида материала следует учитывать следующее:

1) При получении сыворотки крови возникает опасность того, что при отстаивании крови из эритроцитов интенсивно освобождаются протеолитические ферменты, которые могут разрушить определяемое вещество и повредить его меченый аналог во время инкубирования. Поэтому для определения содержания белковых соединений предпочтительно готовить плазму крови.

2) При получении плазмы часто используют гепарин или цитрат. Первый блокирует связывание антитела с антигеном, второй существенно изменяет кислотность среды, к которой чрезвычайно чувствительны некоторые вещества. Поэтому в сухую центрифужную пробирку желательно насыпать 50 мг ЭДТА на 5 мл крови (1:100). Сразу же после забора кровь перемешать с ЭДТА и отцентрифугировать. ЭДТА является слабым антикоагулянтом, блокатором протеолитических ферментов и составной частью многих буферных смесей.

2.1.2. Обработка крови для лабораторных исследований

Полученная и доставленная в лабораторию кровь должна быть быстро обработана, или подвергнута исследованию. Длительное стояние сыворотки над эритроцитами может привести к сдвигам концентраций составляющих, поэтому время стояния сыворотки над сгустком должно быть ограничено. Кроме того, биологический полураспад некоторых исследуемых веществ настолько мал, что стояние сыворотки при высокой комнатной температуре может полностью исказить полученные результаты исследования.

В начале обработки чистой сухой стеклянной палочкой сгусток крови осторожно отделяется от стенок пробирки, пробирка взвешивается и подготавливается к центрифугированию.
Подавляющее количество лабораторных образцов для исследований рекомендуется центрифугировать при +4 °С, со скоростью вращения 500 - 1000 g (1500 - 3000 об/мин) не более 15 - 20 минут. Высокая скорость вращения, как правило, приводит к гемолизу сыворотки или плазмы.

Полученную сыворотку (плазму) необходимо быстро отделить от форменных элементов крови и плотно закрыть пробирки крышкой. Если получена липемическая или гемолизированная сыворотка, образец, как правило, выбрасывается.

2.1.3. Хранение крови (плазмы, сыворотки)

Для определения большинства биологического материала считается возможным хранение его при комнатной температуре не более 6-8 часов.

Некоторые образцы разрешается хранить в течение недели при + 4°С. При необходимости хранения сыворотки (плазмы) более суток, образец рекомендуется замораживать при -20°С, что позволяет проводить исследования, например, спустя несколько месяцев - раковые маркеры, мочевину, холестерин, большинство гормонов и т.д.

При работе с кровью общим правилом должно являться немедленное отделение плазмы или сыворотки от форменных элементов, так как некоторые вещества могут поглощаться и инактивироваться эритроцитами и лейкоцитами. Но даже в простых водных растворах они спонтанно окисляются (например, кортизол превращается в 21-дезоксикортизол).

Большинство веществ биологического происхождения при низкой температуре более стабильны, чем при комнатной, поэтому их обычно хранят в замороженном состоянии. В пробах крови после ее взятия происходит огромное количество процессов. Быстро размножающиеся бактерии и ферментативный гидролиз могут кардинально изменять состояние и содержание всех компонентов. Наиболее эффективным средством замедления и предотвращения таких изменений являются замораживание и быстрое центрифугирование. Однако, даже при –20 °С биологическая система не стабильна, поскольку активность многих ферментов при этом не изменяется. Естественным следствием этого является снижение концентрации веществ при длительном хранении при - 40, -70°С. На примере АКТГ видно, что температурный режим и физико-химические параметры среды имеют решающее значение для сохранности вещества. При хранении АКТГ в течение 18 месяцев при –17 °С его активность, измеряемая биологическим методом, не изменяется. При 37 °С через 45 минут гормон инактивируется на 64 %, через один день при комнатной температуре - на 85%, при 3°С - на 58%. Но кортикотропная активность кислого экстракта аденогипофиза, полученного гомогенизацией ткани в 0,1 % соляной кислоте, сохраняется при 2°С не менее 39 дней.

Плазму или сыворотку непосредственно после получения запаивают в стеклянные ампулы или помещают во флакончики с плотно закрывающимися крышками, замораживают и хранят при температуре не выше -20°С. При таких условиях образцы пригодны для анализа в течение нескольких месяцев, иногда до года. При повторном замораживании и оттаивании происходит частичная деградация белковых веществ (соединений), в то время как для веществ с малым молекулярным весом (например, стероидные гормоны) эти процедуры не столь опасны.

Образцы крови необходимо хранить в хорошо закрытых пробирках, так как потеря в образце влаги в замороженном состоянии может привести к концентрированию исследуемого вещества и получению в итоге ошибочного результата.

По экономическим соображениям важно до госпитализации и до любых терапевтических вмешательств взять образцы плазмы или сыворотки и поместить их в банк сывороток. После установления диагноза, если нет нужды в исследовании биологического материала, и образец не нужен для исследований, он может быть изъят из банка сывороток или плазм, однако, в наличия патологического процесса (особенно опухоли) возможно повторное определение уровня исследуемых веществ или их комбинаций. Кроме того, исследуемый образец рекомендуется оставлять в банке сывороток с тем, чтобы при модификации наборов фирмой-поставщиком, можно было корректно продолжить мониторинг больного. Этот подход также может оказаться полезным, если появится новый маркер, отличающийся более высокой чувствительностью и специфичностью.

При медленном замораживании образуются кристаллы льда, которые разрывают молекулы, особенно белковые, поэтому для оптимальной стабильности вещества необходимо быстрое замораживание. Лучше всего замораживание проводить с самого начала в жидком азоте - в этой среде процесс замораживания идет намного быстрее и не сопровождается разрушением охлаждаемых веществ. Нет общих правил относительно размораживания, однако эксперименты показывают, что следует избегать теплового шока образцов. Размораживание следует производить медленно и постепенно. Некорректно переносить образец сразу же из –20 °С в комнатную температуру, особенно учитывая сезонные различия температур помещения. Важно избегать повторного замораживания образца, лучше предварительно разделить его на несколько пробирок, чтобы не было проблем в случае повтора анализа.

Размораживание и повторное замораживание повреждает практически все биологические пробы. Существует ошибочное мнение о том, что такое воздействие не влияет на тиреоидные и стероидные гормоны. Действительно, структура молекул этих гормонов лучше сохраняется в таких ситуациях. Однако следует помнить, что основной пул стероидных и тиреоидных гормонов циркулирует под “защитой” транспортных белков, которые, как и все другие белки, не выдерживают температурных перепадов и, разрушаясь, перестают “защищать” гормоны. Последние, освобождаясь, немедленно включаются в метаболическую цепь, что, в конечном итоге, ведет к искажению истинной картины.

Химическое окружение, в котором находится препарат, также является важным фактором. При хранении белков в растворах концентрация этих белков всегда должна быть больше 1 мг/мл. Известно, например, что разбавленная антисыворотка теряет активность намного быстрее, чем неразбавленная. Молекулы некоторых веществ биологического происхождения особенно легко разрушаются при окислении, поэтому их надо хранить в присутствии какого-нибудь восстановителя или в атмосфере, не содержащей кислорода.

Учитывая высокую скорость разрушения биологически активных веществ в органах и тканях, извлечение их и приготовление навесок анализа необходимо проводить в условиях постоянного охлаждения, хранить образцы только в замороженном состоянии. Предварительная обработка материала позволяет значительно увеличить его срок хранения. Например, после обработки гипофиза ацетоном первоначальный уровень гонадотропной активности сохраняется в нем при хранении в холодильнике без замораживания не менее года. Экстракты гормонов и чистые препараты сохраняются гораздо дольше, чем нативные образцы.

Известно, например, что в тканях гипоталамуса рилизинг-фактор к лютеинизирующему гормону подвергается сравнительно быстрому метаболическому разрушению. В то же время при хранении в стерильных условиях растворов синтетического ЛГ-рилизинг-гормонов в течение 18 месяцев при 40 °С он полностью сохранял свою биологическую активность и иммунореактивные свойства.

2.1.4. Получение, обработка и хранение мочи

Сбор мочи для определения биологически активных веществ проводят в течении заданных интервалов времени, чаще всего за сутки. На протяжении суток скорость образования и экскреции вещества с мочой колеблется весьма значительно, но эти колебания нивелируются при исследовании суточной порции мочи. В последнее время появляется возможность определять не в суммарной суточной моче и не суммарные вещества, а конкретные вещества и в любое время суток. Например, определение андрогена надпочечникового происхождения дегидроэпиандростерона-сульфата, или 17-окси-прегненолона, предназначенного для выявления адреногенитального синдрома.

Из рациона человека, по меньшей мере, за трое суток до сбора мочи
необходимо исключить продукты и лекарственные препараты, влияющие на
секрецию и метаболизм ряда веществ. Присутствие в моче некоторых
веществ эндогенного и экзогенного происхождения может искажать
результаты определения веществ. Сбор мочи производят в сосуды из дифферентного материала (стекла, пластмассы) во избежание разрушения вещества.

При сборе мочи также соблюдают определенные предосторожности, ли моча не содержит стабилизаторов, как, например, при определении стероидов и их метаболитов, она должна храниться до анализа в замороженном виде (как правило, не более 10 дней). Замороженную мочу со стабилизатором, предназначенную для определения катехоламинов, допускается хранить не более трех дней.

2.1.5. Получение экссудатов и транссудатов

Перед сбором экссудатов и транссудатов в посуду для сбора рекомендуется добавить 2 капли гепарина или на кончике ножа сухого цитрата натрия для предотвращения свертывания. Жидкость собирается в чистую сухую посуду и немедленно доставляется в лабораторию.

2.1.6. Сбор и хранение кала

Для исключения возможных погрешностей в диагностике запрещено доставлять кал после использования клизм, введения свечей, приема внутрь касторового и вазелинового масел и красящих веществ. Кал, взятый для исследования на дисбактериоз, должен быть срочно доставлен в лабораторию, или поставлен в холодильник при 4°С. При исследовании на простейшие запрещено сохранять кал в термостате или теплой воде, поскольку при этом происходит гибель и регенеративные изменения простейших.

2.1.7. Сбор и хранение мокроты

Мокроту рекомендуется собирать при кашле в сухую чистую посуду не более суток, так как при длительном хранении происходит разложение флоры и аутолиз элементов мокроты. Кратковременное хранение ее рекомендуется проводить в холодильнике при 4°С. Для бактериологических исследований мокрота не должна стоять более 4 часов с момента получения.

2.1.8. Сбор и хранение ликвора

Спинномозговая жидкость (ликвор), полученная при люмбальной пункции или пункции желудочков мозга, собирается в сухую чистую посуду и доставляется в лабораторию немедленно, так как при хранении в связи с разрушением клеточных элементов результат исследования может быть недостоверным.

2.2. Обработка лабораторной посуды

В специальных пособиях приводится много советов по тех лабораторных работ, поэтому мы ограничимся лишь некоторыми рекомендациями, имеющими существенное значение для постановки реакции и получения высококачественного результата в радиоиммунных и иммуноферментных методах диагностики. При работе с буферными системами, органическими растворителями и другими веществами, применяемыми для постановки реакции, особое внимание нужно обращать на чистоту реактивов. Вода для буферного раствора должна быть бидистиллированной и деионизированной. Органические растворители, как правило, подлежат очистке (например, эфир пропускается через колонку с оксидом алюминия) и двойной перегонке с дефлегматором (напр., при получении абсолютного этанола).

Лабораторная посуда должна быть тщательно обрабатывается механическими и химическими способами.

Приготовление моющего раствора:

на 1 л дистиллированной воды 20 г порошка типа "Лотос".

Приготовление хромовой смеси:

в фарфоровом стакане растворяют 50 г бихромата калия (K 2 Cr 2 O 7 ) в 100 мл воды. Раствор сливают в сосуд большего размера и добавляют (очень осторожно) 1 л серной кислоты (концентрированной).

Внимание! Добавлять серную кислоту в раствор, но не наоборот!

2.2.1. Обработка посуды с низкой радиоактивностью

Флаконы - снять надписи с крышек ватой, смоченной в спирте, снять крышки в коробку с надписью “грязные крышки”, слить из флаконов сцинтилляционную жидкость в сосуд для жидких радиоактивных отходов, под струей горячей воды прополоскать флаконы от толуола (до исчезновения запаха), загрузить в бак с моющим раствором, оставить на ночь. На следующий день промыть флаконы сначала под струей холодной воды (налить-вылить 10-15 раз), затем также под струей горячей воды и окончательно под струей дистиллированной воды. Сушить в сушильном шкафу при температуре 150-200 °С вниз горлышком.

Пробирки - снять надписи ватой, смоченной спиртом, промыть под струей горячей воды (налить-вылить 10-15 раз), высушить в термостате или сушильном шкафу при температуре до 150 °С, дать остыть и загрузить в (хромовую смесь на 2-3 часа, (БУДЬТЕ ПРЕДЕЛЬНО ОСТОРОЖНЫ!) , вынуть их из хромовой смеси и промыть как флаконы (см. выше).

Крышки - тщательно протираются ватой, смоченной спиртом (два тампона на крышку), высушиваются при комнатной температуре и хранятся в коробке с надписью “чистые крышки”.

2.2.2. Обработка посуды с высокой радиоактивностью

Флаконы - обрабатывать 96° спиртом: заполнить флакон спиртом, перелить спирт во второй флакон, затем в третий, . в десятый, слить в сосуд для жидких радиоактивных отходов. Процедуру повторить. Последующая обработка флаконов аналогична обработке флаконов с низкой активностью. Крышки загрузить в сосуд, залить ацетоном или 96° спиртом с полным погружением крышек, перемешать 3-5 мин, стеклянной палочкой, жидкость слить в емкость для радиоактивных отходов. Процедуру повторить. Разложить на фильтровальной бумаге в один слой и сушить в вытяжном шкафу. Хранить в коробке с надписью “чистые пробирки”.

Все вышеописанные работы проводить только в вытяжном шкафу при полном отсутствии открытого огня.

Для выполнения биохимических исследований в лаборатории посуда проходит определенный цикл обработки в соответствии с требованиями санитарно-гигиенических и противоэпидемических служб. При выполнении в лабораториях коагулологических исследований или проведения исследований определения ряда пептидных гормонов биологическими методами помимо обычной чистой стеклянной посуды используют силиконированную посуду для взятия и хранения крови и плазмы.

2.2.3. Силиконирование посуды

Силиконирование посуды осуществляют для предотвращения контаминации исследуемого образца со стеклом, в котором проводят химическую реакцию. Силиконирование тормозит активацию свертывания крови, предохраняя распад некоторых веществ (например, пептидных гормонов) при инкубации их со встряхиванием.

Стекло покрывается мономолекулярной пленкой силикона:

5% раствор дихлордиметилсилана в толуоле. Чистая сухая посуда заполняется раствором и сразу же выливается. Силиконирование проводят в вытяжном шкафу, затем проводят сушку посуды в сушильном шкафу 180°С в течение часа.

Раствор для силиконирования хранят в посуде с притертой пробкой
в вытяжном шкафу.

Использовать силиконированную посуду не более 5 раз, затем силиконирование необходимо повторить.

Читайте также: