Протокол игх блок что означает

Обновлено: 28.06.2024

Пробую параллельно несколько антител, фирмы Novocastra и Dako. Система визуализации полимерная, Novocastra.
Сейчас работаю с серотонином, Ki67, триптазой тучных клеток, тяжёлой цепью миозина (точно назвать клон и производителя каждого антитела смогу позднее). Ткань - слизистая из различных отделов ЖКТ.

Претензии к получаемым результатам:

Серотонин - слабое специфическое или полное отсутствие какого-либо окрашивания на отдельных стёклах, странная неспецифика (окрашены некоторые ядра).
Ki67, готовый к использованию, с рекомендованной 15 мин. экспозицией при комнат. t, не красит ни после 30-, ни после 30 мин. при 37 гр. Хорошее окрашивание даёт ночная экспозиция в холодильнике, но по каким-то причинам не на всех стёклах, хотя пролиферативная активность так или иначе должна присутствовать везде.
Триптаза тучных клеток даёт сильную неспецифику в стромальном компонента. На форуме прочёл, что при сильной инфильтрации иммун. клетками это ожидаемо. Использовался разбавитель Дако с функцией снижения неспецифич. окраски. Однако только очень высокие разведения (1:500) позволили получить низкий уровень неспецифики, но и специфическое окрашивание стало слабым. То есть неудовлетворительное соотношение сигнал/шум.
Миозин, готовый к использованию, даёт едва ли не более сильное окрашивание, чем триптаза тучных клеток. С чем это может быть связано? Возможно, с избыточной чувствительностью системы детекции? Рекомендовано ли разбавлять предуготовленные антитела?

Усреднённый протокол (пробовал различные варианты, но в данный момент пока наиболее устоявшийся):

Демаскировка в Таргете (10X S1699), 40 мин. в водяной бане (свободной микроволновки или рисоварки нет), затем 40 мин. экспозиции в термостате при 60 гр. (совет старшего коллеги).
Пероксидазный блок:10мин. (негатив. контроль с ДАБом без антител чистый).
Протеиновый блок: от 5 мин. (для антител, дающих слабое окрашивание - серотонин, Ki) до 20 мин. (для антител, стабильно дающих сильную неспецифику - триптаза).
Экспозиция с первичными антителами: 30 мин./ ночь в холодильнике
Постпримари блок: 20 мин.
Вторичные антитела: 30 мин. (негативный контроль без первичных антител чистый).
ДАБ.

Относительно контроля. Не представляю, что можно было бы использовать в качестве такового. НИИ специализированное гастроэнтерологическое. Активности, специфичные к перечисленным антителам, должны встречаться во всех препаратах слизистой. Единственная идея - использовать в качестве негативного контроля в отдельных случаях биоптаты печени (в каких именно - не могу предложить, не ознакомлен детально с её гистологической структурой, полагаю, как минимум, для серотонина).

С уважением; не будучи, строго говоря, вашим коллегой, рассчитываю на ваше желание поделиться мастерством.

Все, что описано Вами, мне навевает только один вопрос: с подготовкой образца до этапа ИГХ-исследования все в порядке?

С соблюдением условий фиксации действительно есть затруднения.
Биоптаты толщиной в среднем 1-2,5 мм фиксируются в 10% забуференном формалине, насколько я знаю, сразу после биопсии. Обычно время фиксации составляет 24-72 ч., но материала поступает много, и в отдельных (худших) случаях может составлять около 110 часов.
Затем проводка: ацетон 2 по 40 мин., толуол 20 мин., термостат с тремя сменами парафина при 60 гр.

Я должен скорректировать информацию по качеству окрашивания. По прошествии 3 суток после заключения оно изменилось.
Серотонин получился полностью, причём никакой неспецифики теперь я не обнаружил.
Триптаза тучных клеток (Дако, клон АА1) также дала чёткое окрашивание, хотя и несколько слабое там, где отсутствует фон. Но похоже, кроме тучных клеток выборочно окрасились и др. структуры: контуры сосудов и что-то, что мы не можем распознать (вероятно, элементы матрикса).
О Ki67 (Новокастра, ММ1) не могу сказать ничего нового, кроме того, что действительно не могу быть уверен в соблюдении оптимальных условий фиксации для той партии стёкол, на которых окраска получилась через одно даже после ночной экспозиции - то были архивные материалы.

Меня продолжает беспокоить ситуация с миозином (Dako, SMMS-1). Это антитела FLEX (Link), что, как я понял, означает, что они предназначены для автоматизированной процедуры с использованием соответствующей линии оборудования. И всё-таки, возможно добиться успеха с ними, работая вручную?

Не могли бы вы ещё поделится мыслями по поводу парафиновых осадков и контроля?

Flex разработан для стейнера, но я работаю с этой системой уже второй год руками и все ок. Уверен, что и другие люди тоже так делают, у кого нет сайнера, а ИГХ есть.

Депарафинирование очень важный вопрос. Парафин - среда неполярная и в ней реакции, интересующие нас практически не идут. Мы удаляем парафин, запускаем реакции, останавливаем их, удаляя из препаратов воду и помещая в кслол, а потом и в заключающую среду. Для депарафинирования есть много веществ и разные способы. Толуол - не самое лучшее вещество. К тому же он еще и вреднее ксилола (очень не рекомендую травиться, особенно, если рядом есть беременные сотрудницы).

Если в лаборатории темпеартура ниже 20оС, то и ксилол и толуол нуждаются в подогреве хотя бы до 30-40оС. В холоде процесс растворения парафина сильно замедляется. Также нужно следить за своевременной сменой растворов.

Все структуры для контроля есть в слизистой желудка, эт точно. Ki67 хорошо виден в скоплениях лимфоидной ткани.

Maxim, спасибо Вам большое за ваши развёрнутые ответы! К сожалению, я, видимо, не всё до конца понимаю.
В частности, мне не ясно, как соотносятся эти две рекомендации:

Цитата Maxim

Да, длительное хранение в 10% формалине ухудшает ИГХ окраску многих маркеров. Поэтому все должно быть оптимально фиксировано. Храните ваши ткани в 70% этаноле иили изопропаноле - все будет ок.

Если речь идет о фиксаторе, то в нем не должно быть никаких спиртовых веществ, потому как формалин действует перекрестным связыванием белков, а спирт - коагуляцией (свертыванием) и поэтому часть поверхностных антигенов в спиртовой фиксации просто не работает.

Обязательно предложу коллегам заменить толуол на ксилол и попробую внедрить в проводку подогрев депарафинизирующего агента (температура действительно ниже 20оС).

Что касается контроля, то Вы, насколько я понял, имели ввиду положительный, мы же нуждаемся в отрицательном.
И, простите, что такое линкер? Речь же не о линкерной молекуле? У нас есть только полимерная система.

Отрицательный контроль на самом деле штука не ахти какая важная. Кстати, в США уже размышляют усиленно о том, чтобы перестать ими пользоваться, поскольку их значиость была переоценена, и расход сил, средств и времени не оправдывает цель.
Реокмендации по + и - контролям также можно вычитать из вкладышей к антителам. Как только у Вас хорошо отработается метод, отрицательный контроль будет избыточен. Но не хороните положитеьный контроль! Это заблуждение.

Линкер - это связывающее антитело. Помомгает в связывании первичного антитела с системой детекции. Нужен далеко не во всех случаях. О нем написано в аанотации к системе детекции и есть в методических руководствах Dako, их можно скачать с их сайта.

Хранение в нейтральном формалине образцов свыше 72 часов не хорошая идея. Фиксация к этому времени вобщем считается зконченной, а перекрестные сшивки продолжают образовыаться и далее происходят внутримолекулярные переконфигурации белков, которые затрудняют восстановление молекул белка в состояние, пригодное для ИГХ-исслдеования. Для этого после 72 часов фиксации ткани и помещают в спирты и там можно их хранить долго. Это я имел в виду запасы, которые ионгда очень нужны. Разумеется, с вырезанными тканями работают сразу и никто их нигде не хранит.

Иммуногистохимическая диагностика рецепторного статуса рака молочной железы (PR, ER, ki-67, Her-2 neu) — исследование биоптата ткани, меченого антителами, под микроскопом. Анализ выполняется для определения рецепторного статуса рака молочной железы.

ИГХ-исследования проводят после выполнения гистологического исследования.

Иммунногистохимическое исследование определяет характер иммунологических нарушений. Анализ выявляет пациенток с аутоиммунным воспалением и аутоиммунным ответом в эндометрии, что определяет тактику их ведения.

Рак молочной железы (РМЖ) — злокачественная опухоль железистой ткани молочной железы. РМЖ занимает первое место среди всех злокачественных заболеваний у женщин.

В зависимости от наличия биологических маркёров опухоли — экспрессии гормональных рецепторов (эстрогена и/или прогестерона), экспрессии HER-2 — выделяют гормон-рецептор-положительный, HER-2-положительный и тройной негативный РМЖ.

HER-2/neu-положительные (HER-2+) типы рака молочной железы отличаются высокой экспрессией белка HER-2/neu;
HER2/neu-негативные (HER-2) типы рака молочной железы отличаются низкой экспрессией или отсутствием белка HER-2/neu.

HER-2

Рецептор эпидермального фактора роста человека 2-го типа, который присутствует в тканях и в норме участвует в регуляции деления и дифференцировки клеток. Его избыток на поверхности опухолевых клеток (гиперэкспрессия) предопределяет быстрый неконтролируемый рост новообразования, высокий риск метастазирования, низкую эффективность некоторых видов лечения. HER-2-положительный РМЖ является особенно агрессивной формой данного заболевания, поэтому точное определение HER-2-статуса имеет ключевое значение для выбора тактики лечения.

Рецепторы к эстрогену (ER) и прогестерону (PR)
Эстроген и прогестерон — основные женские половые гормоны. Они вырабатываются яичниками и являются основными регуляторами деятельности репродуктивной системы женщины.

Рецепторы присутствуют в различных тканях, в том числе в молочных железах и матке.

Рецепторы к эстрогену (ER) и прогестерону (PR) являются веществами белковой природы, которые локализованы на поверхности опухолевой клетки. Под влиянием женских половых гормонов, рецепторы формируют комплекс, который стимулирует появление новых опухолевых клеток. Разрушение этого механизма лежит в основе гормонотерапии.

Иммуногистохимическое определение ER и PR способно повести дифференциальную диагностику характера опухоли, выявить чувствительность опухоли к гормонам. Анализ позволяет скорректировать и уточнить лечение, а также оценить эффективность.

Опухоли с высоким содержанием рецепторов к эстрогенам и прогестерону являются высокодифференцированными. Они обладают низкой пролиферативной активностью и характеризуются не агрессивным течением. Опухоли с такими показателями хорошо отвечают на гормональную терапию и имеют хороший прогноз. Эффективность гормональной терапии составляет около 50% при опухолях, экспрессирующих рецепторы к эстрогенам, и 75% при опухолях, экспрессирующих рецепторы к обоим гормонам.

Если опухолевые клетки имеют низкое число рецепторов к эстрогенам, гормональная терапия обычно неэффективна. Исключение составляют случаи, когда опухолевые клетки экспрессируют рецепторы только к прогестерону. При таком варианте гормональная терапия эффективна у 10% таких больных.

Ki-67

Маркёр пролиферативной активности. Антиген экспрессируется только во время деления клетки, в периоде её покоя маркёр отсутствует.

Показатель позволяет понять, находится ли заболевание в активной фазе или же фазе ремиссии.

Диагностическое выскабливание слизистой оболочки матки рекомендовано проводить в среднюю и позднюю фазу пролиферации — на 7–10-й день менструального цикла.

Материалом для исследования являются парафиновый блок и предметные стекла. В случае, если материалом является образец ткани в растворе формалина, дополнительно должна быть выполнена услуга изготовления стёкол.

При проведении гистологического исследования в сторонней лаборатории необходимо предоставить протокол гистологического исследования.

Интерпретация результатов
Ответ выдаётся в виде описания микропрепарата, применяемых красителей и заключения. Заключение может интерпретировать только врач, направивший на проведение исследования.

Иммуногистохимические исследования или иммуногистохимия (сокращенно ИГХ) — это анализ, который применяется для диагностики различных заболеваний и нашел особенно широкое применение в онкологии. С помощью него обнаруживают маркеры — вещества (белки), которые в больших количествах вырабатываются опухолевыми клетками. Это помогает врачам решать различные диагностические задачи.

Суть исследования ИГХ в том, что к образцу опухолевой ткани добавляют антитела, которые распознают искомое вещество как антиген и связываются с ним. Благодаря этому соответствующие участки опухолевой ткани окрашиваются, и их можно обнаружить при исследовании под микроскопом.

ИГХ — относительно простой, недорогой и в то же время очень эффективный метод диагностики, это незаменимый инструмент для при многих типах рака. Вы можете пройти иммуногистохимию в Москве в Международной клинике Медика24.

Для чего применяют анализ ИГХ в онкологии?

иммуногистохимия помогает решать следующие задачи:

Получить заочную консультацию врача

Как проводят анализ?

После того как исследование завершено, лечащий врач получает из лаборатории заключение. Сроки проведения анализа установлены пунктом 24 Приказа Минздрава России № 179н от 24 марта 2016 г. Если опухолевую ткань исследуют на 5 разных маркеров или меньшее количество, результат должен быть готов в течение одной недели, если на большее количество — в течение 15 дней.

При каких типах рака чаще всего применяют иммуногистохимические исследования?

Иммуногистохимическое исследование биопсийного материала помогает выявлять разные виды опухолевых маркеров. Вот некоторые:

При раке молочной железы: рецепторы к гормонам (эстрогенам, прогестерону), HER2.
При карциноидах (нейроэндокринных опухолях): рецепторы к гормону соматостатину типов 2А и 5.
При немелкоклеточном раке легкого (НМРЛ) и некоторых других типах рака: , ROS1, ALK.
При раке толстой кишки и некоторых других злокачественных опухолях: микросателлитная нестабильность.

Наши врачи ответят на все ваши вопросы

Иммуногистохимические исследования при раке молочной железы

При раке молочной железы самое большое значение имеют три белка: рецептор к эстрогенам, рецептор к прогестерону и HER2. Присутствие этих молекул на поверхности раковых клеток делает их чувствительными к определенным лекарственным препаратам. Если по результатам иммуногистохимии ни одна из этих молекул не обнаружена, диагностируют тройной негативный рак молочной железы. Он отличается более агрессивным течением, его сложнее лечить.

ER (рецептор эстрогенов) связывается с женскими половыми гормонами и стимулирует деление опухолевых клеток. У таких пациентов эффективны гормональные препараты, которые блокируют эффекты эстрогенов.
PR (рецептор прогестерона) связывается с гормоном прогестероном и приводит к аналогичному эффекту. Не существует лекарственных препаратов, которые были бы направлены против PR , однако, определение этого белка помогает правильно оценить прогноз.
HER2 — белок из семейства рецепторов эпидермального фактора роста. Если на поверхности клеток присутствует большое его количество, это стимулирует их бесконтрольные деления. Рецептор HER2 можно заблокировать с помощью таргетного препарата трастузумаба (Герцептина).

В лаборатории содержание этих веществ в опухолевых клетках оценивают с помощью специальных шкал:

0 — менее 10% слабоокрашенных клеток.
1+ — слабое частичное окрашивание более чем 10% клеток.
2+ — окрашивание более чем 10% клеток, от слабого до умеренного.
3+ — сильное, полное окрашивание более 10% клеток.

0 — отрицательный.
1–2 — неопределенный.
3 — положительный.

0–1 — отрицательный.
2 — неопределенный, необходимы дополнительные анализы.
3 — положительный результат, пациент является кандидатом на лечение трастузумабом.

Иммуногистохимические исследования при раке легкого

При раке легкого с помощью иммуногистохимии можно уточнить гистологический тип злокачественной опухоли. Разные подтипы клеток при немелкоклеточном раке легкого могут экспрессировать различные маркеры:

Большинство аденокарцином (злокачественные опухоли из клеток, вырабатывающих слизь): цитокератин 7 (СК7), тиреоидный транскрипционный (), опухолевый белок p63, цитокератин 20 (CK20), опухолевый белок p63, .
Плоскоклеточный рак (из плоского эпителия, который выстилает дыхательные пути): CK5/6, p63, 34bE12. и CK7 при плоскоклеточном раке легкого обычно не обнаруживают.

EGFR — рецептор эпидермального фактора роста, который находится на поверхности опухолевых клеток и заставляет их бесконтрольно размножаться. В данном случае могут быть эффективны таргетные препараты: эрлотиниб (Тарцева), афатиниб (Гилотриф), гефитиниб (Иресса), осимертиниб (Тагриссо), дакомитиниб (Визимпро), нецитумумаб (Portrazza).
ALK — мутация в этом гене встречается при немелкоклеточном раке легкого примерно в 5% случаев. Применяют таргетные препараты: кризотиниб (Ксалкори), церитиниб (Зикадия), алектиниб (Алекенза), бригатиниб (Алунбриг), лорлатиниб (Лорбрена).
ROS1 — ген, мутации в котором возникают при немелкоклеточном раке легкого в 1–2% случаев. При этом помогают такие таргетные препараты, как кризотиниб (Ксалкори), церитиниб (Зикадия), лорлатиниб (Лорбрена), энтректиниб (Розлитрек).
— белок, который связывается с молекулой PD1 на поверхности , подавляет их активность, мешает атаковать опухолевые клетки. Если в опухолевой ткани обнаружен этот маркер, могут быть назначены иммунопрепараты из группы ингибиторов контрольных точек.

Мы вам перезвоним

Иммуногистохимическое исследование при раке матки

Иммуногистохимия эндометрия помогает выявить некоторые важные опухолевые маркеры:

Позаботьтесь о себе, запишитесь на консультацию сейчас

Иммуногистохимические исследования при раке толстой кишки

Некоторые опухолевые маркеры, определяемые с помощью иммуногистохимии, помогают диагностировать колоректальный рак при метастазах с неизвестной локализацией первичной опухоли:

Ядерный транскрипционный фактор CDX2 высоко специфичен для клеток кишечного эпителия.
VIL1 — специфичен для аденокарцином тракта.
GPA33 — ген, кодирующий белок, который экспрессируется в большинстве случаев при колоректальном раке.
SATB2 — белок, обладающий высокой специфичностью и являющийся хорошим маркером первичного и метастатического колоректального рака.
Другие маркеры: mCEA, , кальретинин, , CDH17, CK20, (EPCAM), MUC2, CK7.

Зачастую при раке толстой и прямой кишки бывает важно определить микросателлитную нестабильность и нарушение репарации в четырех генах: MLH1, PMS2, MSH2 и MSH6. Это помогает в оценке прогноза и диагностике синдрома Линча (наследственного неполипозного рака толстой кишки) — генетического заболевания, при котором у больного с более высокой вероятностью и в более раннем возрасте (средний возраст — 37 лет) развивается рак кишечника, некоторые другие злокачественные опухоли.

Возможны следующие результаты иммуногистохимического исследования на синдром Линча при колоректальном раке:

Иммуногистохимическое исследование при раке молочной железы

Сегодня все больше и больше женщин старше 45 лет во всем мире сталкиваются с диагнозом рак молочной железы. Поэтому иммуногистохимическое исследование внесло неоценимый вклад в точную диагностику данного онкологического заболевания.

Несмотря на большое количество методов диагностики в настоящее время, исследование позволяет точно определить тип и характер заболевания, что крайне важно для назначения успешного лечения.

Что такое иммуногистохимия?

Иммуногистохимическое (ИГХ) исследование – относительно новый, революционный метод точной диагностики типа и характера злокачественной опухоли. Считается, что ИГХ обладает максимальной информативностью, по сравнению с другими известными методиками исследования раковых клеток.

Как проводится иммуногистохимическое исследование?

При помощи тонкой иглы онколог достигает новообразования в молочной железе и проводит забор биоптата. Также для исследования используют материал, полученный во время операции.

Тонкий срез материала помещают на предметное стекло и фиксируют при помощи парафина. Затем препарат окрашивают и добавляют к нему меченные антитела. Такой подход позволяет обнаружить опухолевые клетки и разнообразные опухолевые факторы, которые невозможно было бы обнаружить при другом исследовании. В этом и состоит основное достоинство метода.

Цель исследования – подробное изучение рецепторов злокачественных клеток, их строения, ферментов, гормонов, структуры, иммуноглобулинов и прочих биологических веществ.

Вся полученная информация дает цельное представление об опухолевой клетке. Специалисты оценивают ее функциональное состояние, работу системы апоптоза (запрограммированного старения поврежденных клеток) и уточняют межклеточное взаимодействие.

Результат ИГХ имеет решающее значение при выборе тактики лечения, а также позволяет оценить прогноз состояния пациента.

О чем расскажет иммуногистохимический анализ

Отдельно стоит сказать о расшифровке этого непростого метода. Проводится она квалифицированным врачом онкологом.

Иммуногистохимический метод анализа позволяет специалисту определить важные характеристики опухоли: вид и подвид злокачественного новообразования, источник метастазирования, площадь и скорость распространения опухолевых клеток по всему организму больного, эффективность проводимого лечения. Он является максимально информативным по сравнению его с другими привычными исследованиями при онкологии молочных желез.

Что означает в заключении показатель Ki-67?

Это мера степени агрессивности опухоли – неотъемлемый атрибут заключения иммуногистохимического анализа

Оценка результатов

Оценка всех результатов обследования проводится целостно лечащим онкологом. Учитывая данные визуального осмотра пациента, сопутствующую патологию и данные лабораторных и инструментальных методов исследования. Ни в коем случае ИГХ-анализ не может быть расшифрован в отрыве от пациента или самостоятельно. Доверьте свое здоровье профессионалам!

Постоянное контролирование новых ИГХ-маркеров рака молочной железы в процессе анализа помогает назначать самое подходящее в данной конкретной ситуации лечение и давать прогноз пациенту на будущее.

В настоящее время, несмотря на большое количество маркеров, у пациентов чаще всего определяют рецепторы к гормонам ki-67 и her-2-neu.

Вывод

Иммуногистохимическое исследование безусловно играет важную роль в диагностике рака молочной железы. Но при этом, его нельзя считать основным.

Основным принципом профилактики и ранней диагностики рака молочной железы была и остается ежегодная диспансеризация женщин старше 45 лет, а также онкологическая настороженность докторов. В объем скрининга входит маммография и обязательная консультация врача – маммолога.

В настоящее время качественная диагностика многих онкологических заболеваний невозможна без проведения иммуногистохимического исследования. Иммуногистохимическое исследование (ИГХ исследование) – это метод микроскопического исследования тканей. В процессе ИГХ исследования срезы тканей обрабатываются маркированными специфическими антителами к выявляемому веществу.

Это высокоточный и информативный метод, позволяющий не только выявить новообразование, но и разработать оптимальную тактику лечения.

ИГХ обязательно назначают при раке лимфатической системы, когда поражаются лимфатические узлы или внутренние органы.

ИГХ исследования – что это такое

ИГХ представляет собой методику, используемую в патологической анатомии для диагностики раковых и доброкачественных опухолей. Его назначают, когда установить точный диагноз стандартным гистологическим способом невозможно или необходима детализация клинически значимых параметров новообразований на молекулярном уровне.

Очень часто гистологии бывает недостаточно. В большинстве случаев причиной этому является крайне нетипичная структура патологического образования, что существенно затрудняет постановку точного диагноза. В частности, при лимфоме и лейкозе ИГХ делают практически всегда.

Нужно отметить, что всего насчитывается около 70 разновидностей лейкозов и лимфом. Верифицировать некоторые их них удается лишь путем нескольких исследований – гистологического, иммуногистохимического и молекулярно-генетического.

Суть методики

При развитии любого опухолевого процесса формируются чужеродные организму белки – антигены, в противовес которым иммунная система человека вырабатывает антитела – иммуноглобулины. Они прикрепляются к антигенам и связываются с эпитопами – основными частями антигенных макромолекул. Антитела выполняют сразу две функции: связывающую и эффекторную. Проще говоря, они напрямую мешают антигенам наносить вред и одновременно активируют комплемент, запуская ответную реакцию иммунитета.

Роль антигенов в данном случае принадлежит атипичным опухолевым клеткам. Перед тем как провести иммуногистохимическое исследование, срезы биометариала маркируются специфическими антителами к ним. В целях дальнейшей визуализации эти антитела окрашиваются ферментами. Далее, используя высокоточную оптику, наблюдают за поведением испытуемых клеток.

Если белковые соединения, помеченные как антитела, связываются с опухолевыми клетками, будет видно свечение – флюоресценцию, свидетельствующую о наличии искомых веществ. Так выявляют, например, рецепторы к гормонам и онкомаркеры. При подозрении на рак молочной железы таким образом обнаруживаются рецепторы к эстрогену и прогестерону.

Кому показано

Иммуногистохимическое исследование часто проводят для того, чтобы избежать назначения агрессивного лечения токсичными препаратами

В отдельных случаях иммуногистохимический анализ позволяет установить источник метастазов, когда локализация первичного очага неизвестна, а также провести дифференциальную диагностику при нескольких новообразованиях разного происхождения.

ИГХ может назначаться при бесплодии, хронических патологиях эндометрия, матки и яичников, привычных выкидышах. Ее целесообразно делать и в том случае, если беременность не наступает после нескольких процедур ЭКО.

Иммуногистохимия поможет обнаружить наличие клеток, препятствующих зачатию, и определить дальнейшую тактику лечения бесплодия.

Методом ИГХ оценивают и лекарственную чувствительность путем выявления:

рецепторов половых гормонов – эстрогена, прогестерона и андрогенов. Необходимо при поражении женской репродуктивной системы;
фактора роста опухоли Her2/neu. Биомаркер и терапевтическая мишень агрессивных типов рака груди;
соматостатиновых рецепторов 2а и 5 типа, важных при карциноидах;
мембранного белка иммуноглобулинов PD-L1, гена ALK и рецептора тирозинкиназы ROS. Данные показатели исследуются преимущественно при немелкоклеточном раке легких;
микросателлитной нестабильности;
индекса пролиферативной активности.

Трудно переоценить важность микросателлитной нестабильности (MSI), которая существенно расширяет прогностические и лечебные возможности у пациентов со злокачественными поражениями ЖКТ. Новообразования с низкой MSI медленнее растут и реже дают метастазы. Поэтому своевременное выявление MSI позволяет избежать назначения агрессивной, но заведомо неэффективной терапии.

Как проводятся ИГХ исследования

Для выполнения ИГХ необходим биоматериал, забор которого осуществляется в основном путем взятия биопсии. Несколько реже его получают в ходе эндоскопической или классической открытой операции. Способ изъятия пораженной ткани зависит от типа и локализации рака. При этом следует учесть, что брать материал на анализ следует до начала терапии. В противном случае возможно искажение результатов исследования.

Этапы проведения анализа:

Полученный биоматериал фиксируют, обрабатывая в формалине, и отправляют в лабораторию.
Затем его обезжиривают и подвергают повторной фиксации, после чего заливают парафином.
Далее производится микротомирование – с готовых парафиновых блоков делаются тонкие срезы, которые помещаются на специальные стекла. Толщина среза составляет не больше 1 мкм.

Для забора материала назначают биопсию опухоли или изымают фрагмент ткани в ходе оперативного вмешательства.

Когда ткани лежат на стеклах, их обрабатывают маркированными специфическими антителами к выявляемому веществу, которое в данной ситуации служит антигеном. Количество их видов ограничено несколькими десятками. Исследование реакций с применением до 5 разных антител проводится на малой панели. При более масштабном эксперименте нужна большая панель.

Завершающим этапом анализа является само иммуногистохимическое исследование, являющееся методом микроскопического исследования тканей. Этот метод обеспечивает наиболее эффективное выявление в срезах тканей искомых веществ.

В ходе ИГХ рак любого органа проявляется эффектом свечения – флюоресценции, – благодаря чему выявляются злокачественные клетки, определяются рецепторы гормонов или другие заданные параметры.

Расшифровка

Изучением срезов биоматериала занимаются врачи-патологоанатомы. Они же первыми составляют прогноз, исходя из выявленного типа и объема онкогенных клеток. При расшифровке результатов особое внимание обращают на показатель К-67 – специфический белок, антиген ракового процесса. Он вырабатывается только при активном делении клеток, а в состоянии покоя не продуцируется.

К-67 – это именно тот онкомаркер, что показывает степень озлокачествления процесса. Если его уровень в процентном содержании составляет 85% и выше, то заболевание прогрессирует стремительно и с высокой вероятностью вскоре приведет к смерти.

Благоприятным будет прогноз при К-67=10%. В случае грамотно составленного плана терапии есть все шансы на полное выздоровление, зачастую без риска рецидива. При К=30% констатируют среднюю степень тяжести болезни, что означает достаточно быстрый рост рака. С помощью курсовой химиотерапии его можно замедлить и даже остановить.

Однако К-67 – это не единственный показатель, который указывается в медицинском заключении. Также записываются антитела, к которым выявлены соответствующие антигены, тип и количество последних.

Полученное заключение врач-патологоанатом передает лечащему онкологу, который подбирает лечение. Для оценки его эффективности иммуногистохимию проводят еще раз после завершения терапевтического курса.

Видео

* Представленная информация не может быть использована для самостоятельной постановки диагноза, определения лечения и не заменяет обращение к врачу!

Читайте также: