Определить лд50 по методу рида и менча согласно протоколу титрования вируса

Обновлено: 21.05.2024

Изобретение относится к медицине, а именно к вирусологии, стоматологии и экспериментальной фармакологии, и направлено на моделирование экспериментального рецидивирующего поражения слизистой оболочки полости рта лабораторных мышей в виде вирус-индуцированного стоматита. Может быть использовано для испытания эффективности новых противовирусных и иммуномодулирующих средств лечения герпетических стоматитов.

В настоящее время герпетическая инфекция остается наиболее распространенной и плохо контролируемой. Заболевания, обусловленные вирусом простого герпеса (ВПГ) как причина летального исхода занимают среди инфекционных заболеваний детей младшего возраста второе место (15,8%) после гриппа (35,8%) [1. Рабинович, И.М. Рецидивирующий герпетический стоматит / И.М. Рабинович, О.Ф. Рабинович, М.В. Разживина. - М.: ГЭОТАР-Медиа, 2005. - С. 64. Левончук, Е.А. Герпетическая инфекция полости рта / Е.А. Левончук // Современная стоматология. - 2005. - №1. - С. 19-22

Существующие средства и схемы терапии герпетического рецидивирующего стоматита не всегда оказываются достаточно эффективными и характеризуются большим количеством противопоказаний и побочных эффектов. Одной из возможных причин подобного состояния дел - отсутствие адекватных экспериментальных моделей рецидивирующего герпетического стоматита.

Отсутствие действенных вакцин и невозможность полного излечения в совокупности с практически 100% охватом популяции инфекцией определяют актуальность изучения герпесвирусной инфекции. Современные медико-биологические исследования заболеваний невозможно представить без применения экспериментального моделирования патологии. В качестве моделей используют как животных, так и культуры клеток - клетки различных типов, выделенных из организма и поддерживаемые в жизнеспособном состоянии в искусственных условиях.

Выбор подходящей модели для изучения инфекционного заболевания in vivo важен для адекватной экстраполяции полученных данных на процессы, протекающие в живом организме. В ряде случаев их использование не имеет альтернатив, например, при проведении доклинических исследований терапевических препаратов. Роль герпесвирусной инфекции (вируса простого герпеса 1 и 2 типов) как этиологического фактора в развитии рецидивирующего стоматита общепризнана. Однако при моделировании хронического рецидивирующего стоматита, согласно данным литературы, возникает необходимость усиливать повреждающее действие слизистой оболочки полости рта (СОПР) вирусами простого герпеса (ВПГ-1 и ВПГ-2) с помощью других иммунодепрессантов.

Существующие средства и схемы терапии рецидивирующего герпетического стоматита не всегда оказываются эффективными и характеризуются большим количеством противопоказаний и побочных эффектов. Одной из возможных причин подобного состояния дел - отсутствие адекватных экспериментальных моделей герпетических стоматитов. Наиболее близким по совокупности существенных признаков к заявляемому изобретению является способ создания модели хронической рецидивирующей герпетической инфекции у млекопитающих [Порываева А.П. Теоретические и практические аспекты моделирования хронической герпесвирусной инфекции, доктор. Дис. 03.02.02 - Вирусология 2015, 191 с.]

Недостатком данного способа моделирования является тот факт, что для оценки выраженности клинических проявлений обострений хронического герпетического стоматита необходимо наблюдение за зараженными вирусом простого герпеса (ВПГ-1) мышами не менее 320 сут. В предлагаемом нами способе время исследования можно сократить до 50-60 сут.

Наиболее близким по технической сущности к предлагаемому изобретению является [Способ получения состава для моделирования афтозного стоматита у животных Чемикосова Т.С. и соавт.; патент №2104588, G09B 23/28, опубл. 10.02.1998].

Недостатком данного способа является то, что при формировании афтозного стоматита не учитывается герпесвирусная составляющая патологического процесса.

В связи с этим задачей предлагаемого изобретения является разработка адекватной и информативной экспериментальной модели рецидивирующего герпес-индуцированного стоматита.

Техническим результатом предлагаемого нами изобретения является повышение воспроизводимости и приближение модели экспериментального рецидивирующего герпетического стоматита к клиническому течению данной патологии у человека.

Технический результат достигается тем, что в способе моделирования экспериментального рецидивирующего стоматита, включающем дозированное введение лабораторным мышам в течение заданного времени суспензии вируса простого герпеса 1 типа, осуществляют на фоне иммунодепрессии, вызываемой введением 0,2 мл гидрокортизона, вводимого экспериментальным животным за 2 часа до инфицирования, затем герпесвирусную суспензию вводят внутрибрюшинно двукратно в течение 3-х недель в дозе 1LD₅₀, через 21 день после первичного заражения проводят повторное инфицирование мышей путем скарифицирования слизистой полости рта и внесения на поврежденную слизистую 30 мкл суспензии ВПГ-1 в дозе 1 LD₅₀

Заявляемый способ обладает новизной в сравнении с прототипами, отличаясь от них таким существенным признаком как использование в модельных исследованиях вышеперечисленных патента - прототипа афтозной смеси, которую вводят интактным животным с целью активации аутоиммунных процессов с последующим образованием афт. При этом следует отметить, что полностью исключается основой этиологический фактор герпесвирусного рецидивирующего стоматита - герпесвирусная инфекция.

Заявляемый способ реализуют следующим образом:

Способ моделирования экспериментального рецидивирующего герпетического стоматита, включающий дозированное применение суспензии вируса простого герпеса (ВПГ-1, штамм УС). Предварительно обеспечивают иммунодепрессию, вызываемую гидрокортизоном, вводимым экспериментальным животным за 2 часа до инфицирования. Суспензию вируса вводят мышам в течение заданного времени внутрибрюшинно в дозе 1ЛД50, через 21 день после развития герпетической инфекции, не погибшим животным повторно в рану поврежденной скарификатором слизистой оболочки полости рта вносят 30 мкл суспензии ВПГ-1 в вышеназванной дозе, вызывающей развитие герпетического рецидивирующего стоматита на 6-7 сут.

Проведенные исследования иллюстрируются следующими примерами.

Для определения кратности и дозы введения суспензии вируса простого герпеса первого типа (ВПГ-1) при моделировании хронического герпетического рецидивирующего стоматита был проведен эксперимент на мелких лабораторных животных, а именно на белых беспородных мышах-самцах массой 16-18 г. Животных содержали в стандартных условиях вивария на обычном пищевом рационе, со свободным доступом к воде.

Моделирование герпетической инфекции осуществляли путем внутрибрюшинного введения животным суспензии ВПГ 1 типа или ВГП 2 типа в объеме 0,5 мл. За 2 ч перед заражением животным в целях понижения естественной резистентности внутримышечно вводили 0,2 мл гидрокортизона. Численность опытных и контрольных групп составляла по 30 мышей в каждой.

Антушевич Александр Евгеньевич
Степанов Александр Валентинович
Цыган Николай Васильевич
Гребенюк Александр Николаевич
Ярцева Анна Александровна
Климов Андрей Геннадьевич
Мельничук Олеся Валерьевна
Макеев Борис Лаврович

Глинских Нина Поликарповна
Донник Ирина Михайловна
Порываева Антонина Павловна
Шилова Евгения Николаевна
Устьянцев Игорь Васильевич
Устьянцев Павел Васильевич

Таргонский Сергей Николаевич
Усова Светлана Владимировна
Мухина Ольга Николаевна
Шарыпова Марьяна Григорьевна

Арсененко Людмила Дмитриевна
Арсененко Алексей Станиславович
Середа Татьяна Васильевна

Мальханов В.Б.
Деребизова М.А.
Хафизов Г.Г.
Иванова Т.С.

Вичканова Серафима Александровна
Бортникова Валентина Васильевна
Крепкова Любовь Вениаминовна
Крутикова Наталия Макарьевна
Шипулина Людмила Дмитриевна
Сокольская Татьяна Александровна
Колхир Владимир Карлович
Быков Валерий Алексеевич

Мальханов Владимир Борисович
Матюхина Екатерина Николаевна
Имаева Альфия Камилевна

Антушевич Александр Евгеньевич
Антушевич Анна Александровна
Антонов Виктор Георгиевич
Гребенюк Александр Николаевич
Климов Андрей Геннадьевич
Макеев Борис Лаврович

Николаева Анастасия Александровна
Базарный Владимир Викторович
Журавлев Валерий Петрович
Полушина Лариса Георгиевна

Львова И.И.
Корюкина И.П.
Фельдблюм И.В.

Реферат патента 2019 года СПОСОБ МОДЕЛИРОВАНИЯ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОГО РЕЦИДИВИРУЮЩЕГО ГЕРПЕТИЧЕСКОГО СТОМАТИТА

Изобретение относится к медицине, а именно к вирусологии, и стоматологии, и экспериментальной фармакологии, и может быть использовано для моделирования экспериментального рецидивирующего герпетического стоматита. Осуществляют дозированное введение мышам вируса простого герпеса 1 типа (ВПГ-1). Предварительно экспериментальным животным вводят 0,2 мл гидрокортизона за 2 часа до инфицирования. Затем герпесвирусную суспензию вводят внутрибрюшинно двукратно в течение 3-х недель в дозе 1LD₅₀. Через 21 день после первичного заражения проводят повторное инфицирование мышей путем скарифицирования слизистой полости рта и внесения на поврежденную слизистую 30 мкл суспензии ВПГ-1 в дозе 1 LD₅₀. Способ обеспечивает повышение воспроизводимости и приближение модели экспериментального рецидивирующего герпетического стоматита к клиническому течению данной патологии у человека за счет дозированного введения лабораторным мышам в течение заданного времени суспензии ВПГ-1, осуществляемого на фоне иммунодепрессии, вызываемой введением гидрокортизона. 3 табл., 3 пр.

Формула изобретения RU 2 709 842 C1

Способ моделирования экспериментального рецидивирующего герпетического стоматита, включающий дозированное введение мышам вируса простого герпеса 1 типа (ВПГ-1), отличающийся тем, что предварительно экспериментальным животным вводят 0,2 мл гидрокортизона за 2 часа до инфицирования, затем герпесвирусную суспензию вводят внутрибрюшинно двукратно в течение 3-х недель в дозе 1LD₅₀, через 21 день после первичного заражения проводят повторное инфицирование мышей путем скарифицирования слизистой полости рта и внесения на поврежденную слизистую 30 мкл суспензии ВПГ-1 в дозе 1 LD₅₀.

Читайте также: